蛋白质磷酸化是一类由蛋白激酶催化的重要的蛋白质翻译后修饰，是在蛋白激酶的作用下，三磷酸腺苷（ATP）或三磷酸鸟苷（GTP）的末端磷酸分子断裂并与底物蛋白氨基酸残基共价结合的过程。
蛋白质磷酸化位点分析主要研究蛋白质磷酸化发生在肽链的几号位氨基酸上以及发生在何种氨基酸上。可通过磷酸酶法或串联质谱测序法进行检测，将样品蛋白进行酶解，得到肽段混合物，然后特异性识别并富集发生磷酸化的肽段，再对该肽段的氨基酸序列进行分析，找出发生磷酸化的位点。
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